意图基因与载体的衔接及其后续的转化进程习惯上称为克隆 (cloning),也便是说,在体外将 DNA 分子片段与载体 DNA 片段衔接,转入细胞取得许多仿制的进程中 DNA 分子克隆(或基因克隆)。
DNA 片段的克隆需求适宜的载体(*载体是指运载外源 DNA 有用进入受体细胞内的东西),载体可所以质粒、噬菌体或许病毒,一般通过人工改造。取得意图基因后有必要将其放在必定的载体内才能在宿主细胞内扩增或表达。
二是该载体有必要具有合适的酶切位点,且这些酶切位点不在仿制原点区域内。以上两条,确保了载体的可繁衍性和可使用性。
为了便于克隆,载体上常有挑选符号,如对抗菌素的抗性,某些基因产品的显色反响等。
为了更详细的介绍克隆,咱们贴心肠为我们预备了两个视频,更详尽地解说克隆:
因为现在许多基因都是使用 PCR 技能取得,因而这儿简略介绍 PCR 产品的克隆战略:
作为克隆的第一步便是要取得 PCR 产品。不管研讨的开始资料是 RNA 仍是 DNA ,最重要的是要有一种有用的办法对 PCR 产品进行克隆。
现在已建立了多种对 PCR 产品进行克隆的办法,详细挑选哪种办法取决于以下几个要素:1. PCR 产品序列是否已知;2. 载体上有哪些单一的限制性酶切位点能够使用;3. 克隆 PCR 产品的用处等。